В статье заведующего лабораторией генетической инженерии, к.б.н. Шустова Александра Вячеславовича рассматривается проблема внедрения эффективной терапии рака с использованием технологии химерного антигенного рецептора (CAR-T).

Основная проблема заключается в глобальном дефиците терапевтических лентивирусных или ретровирусных векторов, которые используются для производства всех зарегистрированных в настоящее время препаратов CAR-T-клеток.

Для решения этой проблемы, автор статьи описывает оптимизированные условия для производства лентивирусных векторов в академических лабораториях. Он обнаружил, что метод преципитации с фосфатом кальция является наиболее эффективным для трансфекции высокоплотных культур клеток, что необходимо для получения высоких титров векторов.

Автор также описывает протоколы для производства лентивирусных векторов в различных объемах, от 6-луночных планшетов до 5-слойных клеточных фабрик. Процесс масштабирования производства сохраняет высокие титры векторов на уровне более 10^8 трансдуцирующих единиц на миллилитр.

Кроме того, автор показал, что концентрирование лентивирусных векторов ультрацентрифугированием с использованием сниженных скоростей центрифугирования по сравнению с обычно рекомендуемыми скоростями, позволяет получать партии векторов с титрами на уровне 10^10 инфекционных частиц.

Полученные лентивирусные векторы были использованы для трансдукции первичных человеческих Т-лимфоцитов, что позволило получить Т-клетки с химерным антигенным рецептором, свойства которых были исследованы и показана возможность их применения для терапии.

Таким образом, данная работа демонстрирует, что производство лентивирусных векторов в академических условиях может быть экономически жизнеспособным подходом для обеспечения доступности CAR-T-терапии.

Работа выполнена в рамках гранта «эффективная клеточная иммунотерапия в Казахстане: определение оптимального субпопуляционного состава CAR+ клеток для максимальной активации, пролиферации и персистенции» Министерства науки и высшего образования Республики Казахстан.